Determinación del protocolo más efectivo para la detección de transgenia (evento nk 603) en semillas de Zea mays

Abstract

Lo puntual de esta investigación fue determinar el mejor tejido en semillas de maíz, para la detección de transgenia por medio de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR). Fueron utilizadas semillas de maíz no modificado y semillas de maíz modificado genéticamente, evento NK 603, resistente a Glifosato. Fueron comparados tres protocolos de extracción de ADN, asi como la amplificación del promotor CAMV 35S desde plantulas, embrión y harinilla. Además fue analizado el mejor método para obtener las muestras. Los resultados fueron los siguientes: 1. Protocolo de Extracción Lodhi: Este Protocolo es muy lento, 2 días en obtener el DNA. Los resultados no fueron los esperados, debido a que no se pudo visualizar la amplificación de bajas concentraciones de OGM NK603, en todas las matrices. 2. Protocolo de Extracción por el método CTAB, con este protocolo se obtuvo ADN de calidad y el método resulto ser mas rápido que el método Lodhi, 1 día en obtener el DNA. Se pudo visualizar los resultados, en todas las matrices y con los dos métodos de obtención de muestras (por peso y cantidad). 3. Protocolo DNeasy Plant Mini kit (250) QlAGEN: Cuando se realizó la extracción de ADN, se pudo determinar que era un sistema muy rápido, 5 horas en obtener el DNA. Es fácil de utilizar, ideal para tejido verde. No se visualizaron amplificaciones en embriones y harinilla a bajas concentraciones de OGM. El Método de extracción CTAB, es recomendado para las 3 matrices estudiadas. El mejor sistema de obtención de muestras es por peso, por su factibilidad y prontitud en obtener el material, con respecto a la toma de muestra por cantidad.

Lo puntual de esta investigación fue determinar el mejor tejido en semillas de maíz, para la detección de transgenia por medio de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR). Fueron utilizadas semillas de maíz no modificado y semillas de maíz modificado genéticamente, evento NK 603, resistente a Glifosato. Fueron comparados tres protocolos de extracción de ADN, asi como la amplificación del promotor CAMV 35S desde plantulas, embrión y harinilla. Además fue analizado el mejor método para obtener las muestras. Los resultados fueron los siguientes: 1. Protocolo de Extracción Lodhi: Este Protocolo es muy lento, 2 días en obtener el DNA. Los resultados no fueron los esperados, debido a que no se pudo visualizar la amplificación de bajas concentraciones de OGM NK603, en todas las matrices. 2. Protocolo de Extracción por el método CTAB, con este protocolo se obtuvo ADN de calidad y el método resulto ser mas rápido que el método Lodhi, 1 día en obtener el DNA. Se pudo visualizar los resultados, en todas las matrices y con los dos métodos de obtención de muestras (por peso y cantidad). 3. Protocolo DNeasy Plant Mini kit (250) QlAGEN: Cuando se realizó la extracción de ADN, se pudo determinar que era un sistema muy rápido, 5 horas en obtener el DNA. Es fácil de utilizar, ideal para tejido verde. No se visualizaron amplificaciones en embriones y harinilla a bajas concentraciones de OGM. El Método de extracción CTAB, es recomendado para las 3 matrices estudiadas. El mejor sistema de obtención de muestras es por peso, por su factibilidad y prontitud en obtener el material, con respecto a la toma de muestra por cantidad.